在教宗儒略二世的指示下，梵蒂冈博物馆在1508年前后，抱着“以艺术来诠释神学，表达出圣经的连贯性以及救恩的普适性”的想法开始兴建。之后在1541年，由伟大的画家米开朗琪罗和罗马诺，以及当时教会的工场画师队，历经两位教宗任期，方完成了这项宏愿。当时所绘的壁画如今还完整的保留在西斯廷礼拜堂之内。

这里按年代顺序展出的有从拜占庭时代到现代的以宗教绘画为主的作品。第二展室里是纪奥特和纪奥特派的作品。第三展室是佛罗伦萨派。有弗拉·安杰里科、费里波·利庇等人的作品。第四展室是梅罗兹奥·达·弗路里的作品《演奏音乐的天使》。第五展室有15世纪温布里亚派的佩尔吉塔诺·平托鲁奇奥的作品。第八展室有拉斐尔的杰作《玛利亚的加冕》、《弗里良的玛利亚》、《基督的样貌变化》等不要错过。《基督的样貌变化》是他最后的作品，下方是由他的弟子完成的。另外，还有10张拉斐尔画的草图，由布留塞尔织的壁毯。第九展室有列奥纳德·达·芬奇未完成的《圣·吉罗拉莫》、巴洛克艺术的巨匠贝尔尼尼的《基督降架》。

现在的博物馆除了日常的展出之外，还致力于古代艺术品的修复。

精彩画册：7:00 – 19:00